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如何提取细胞蛋白

生信菜鸟团  · 公众号  · 生物  · 2021-02-02 22:41
以六孔板,贴壁生长的人支气管上皮细胞(HBE)为例略显杂乱的工作台取2ml EP管,吸取各组细胞上清液,冰上保存。3000rpm 离心20min, 吸取上清分装于EP管中,-80℃保存备用。更换大小枪头吸干各孔细胞上清液后,用预冷的PBS清洗细胞一次,吸弃PBS,待其完全晾干。取RIPA:PMSF=100:1,制成裂解液混合物。向每孔细胞中加入60微升裂解液,晃动六孔板使细胞与裂解液充分接触。冰上裂解15分钟。应用刮板快速刮取细胞碎片,收集于1.5mlEP管中。超声破碎。预冷高速低温离心机,12000rpm 4℃ 离心10 min,取上清。蛋白定量。向EP管中加入四分之一体积的loading buffer。100℃ 煮样5min。-80℃条件保存。 基础实验系列:如何进行细胞传代如何制备pbmc ………………………………

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