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生物通  · 公众号  ·  · 2022-08-13 08:00
现如今,几乎所有生物研究领域都会涉及分子克隆技术。所谓的克隆是指,在大多数细菌载体(如质粒)中插入基因序列,之后,研究人员便可大量复制所插入的序列。完成克隆之后,即可对这些序列进行操纵和表达,从而为开展功能性研究提供支持。传统的 DNA 片段克隆方法涉及将从染色体、质粒或粘粒获得的限制性内切酶消化片段连接到所选克隆载体的特定位点。标准分子克隆技术需要通过酶促修饰和纯化步骤来制备用于连接和转化到细菌细胞中的 DNA 序列。通常情况下,要转移用于克隆的 DNA 序列,首先需要使用限制性内切酶消化 DNA 以产生末端序列突出端(也称为粘性末端),这有助于连接到经过相似处理且具有兼容粘性末端的载体中。在每个消化步骤后,需要去除释放的接头序列,以免其在随后的片段连接期间与所需的插入片段 ………………………………

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