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qPCR理论的再学习

医博云天  · 简书  ·  · 2019-02-03 09:21

2019年2月3日，星期日，小雨
今日科室举办年终总结会，遇到了好些小兄弟，刚好求教一些科研知识。
1、问：qPCR加样时三个复孔的设置，可以将mix、cDNA、引物混在一起后再分装三个复孔吗？
答：有的人说可以，有的人说如此设置就没有所谓三个复孔的意义了。
2、问：qPCR的cDNA如何加样，如何稀释？
答：由于cDNA用量比较少，如果用1ul加样，会产生比较大的加样误差，而将cDNA稀释之后再加样，会减少加样误差。比如将逆转录之后的cDNA稀释20倍，再取4ul。
3、问：引物如何稀释？
答：定制回来的引物浓度为100mM，而引物工作浓度为10mM，所以将其稀释10倍后，并且可以提前将上、下引物提前混合，备用。




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