通过全蛋白质组降解子图谱阐明E3泛素连接酶的特异性

近日，哈佛医学院Stephen J. Elledge团队在Molecular Cell期刊上发表了一项研究E3泛素连接酶特异性的工作。E3泛素连接酶特异性识别底物的其中一种机制是通过识别底物的降解子（degron）。然而，自 1986 年发现第一个降解子以来，已知降解子的数量一直很少并且许多降解子的特征不清楚。研究者开发了一种将高通量遗传学与机器学习相结合的方法，用于研究E3泛素连接酶与降解子的对应关系及降解子的序列组成模式。研究者开发了如上图所示的流程。首先，研究者设计了一个含47万个肽段的寡核苷酸文库，用于编码整个人类蛋白质组的多肽，然后将文库与GFP报告基因的C末端克隆在一起，作为全局蛋白质稳定性肽组文库（global protein stability-peptidome library, GPS-peptidome library）。研究者将克隆的多肽文库被包装进慢病毒中，感染 HEK293T 细胞，通过荧光激活细胞分 ………………………………