哈工大黄志伟组Cell Research解析高保真Cas9三维结构

PAM兼容性和脱靶效应是阻碍SpCas9系统潜在治疗应用的两大限制。已经报道了几种新的 SpCas9突变体克服上述两大障碍。例如，高保真SPCA9变体SpCas9 - HF1、eSpCas9和HypaCas9是通过SPCA9的DNA相互作用残基的多次突变来制造的，以降低靶DNA识别和切割的能量。最近，噬菌体辅助连续进化( PACE )方法被用于鉴定识别多个PAM序列的几个SpCas9变体。其中一种变体被称为xCas9 3.7 (携带7个点突变，A262T、R324L、S409I、E480K、E543D、M694I和E1219V，与野生型( WT) SpCas9相比)，在哺乳动物细胞中对5′- NG - 3′、5′- GAA - 3、′和5′- GAT - 3′PAM序列具有最广泛的相容性因此，xCas9 3.7变体代表了高编辑效率、广泛的PAM兼容性和高DNA靶向特异性的集合。然而，xCas9 3.7的PAM识别范围扩大和DNA特异性提高的分子机制 ………………………………