生物极客大讲堂 | 教你如何设计gRNA

责编丨小 程本期要用到的工具：Benchling  请点击阅读原文访问第一步 确定您想要定位的基因组区域您需要首先找到哪些外显子存在于您的靶基因的所有转录物中。要在Benchling中获取此信息，请点击右上角的“create”，然后点击“create CRISPR”。 在下一个对话框中，您可以搜索您感兴趣的基因。以下是在人类基因组（hg38）中搜索Ano6的示意图。在Advanced Settings中，您可以选择所有转录物以在基因组上应用注释。然后您可以查看您感兴趣的基因的所有转录物变体的外显子为了使用CRISPR制作Ano6敲除细胞，您可以设计gRNA以定位红色矩形中的外显子，因为它包含在所有Ano6亚型中并接近5'末端。小贴士：确保目标位点上游没有关键的功能域，因为截断的蛋白质可能仍然有一些 ………………………………