RT-PCR逆转录要素介绍及实验操作过程中的问题详细解答

点击生物器材网 关注我们逆转录（reverse transcription）实验作为是常见的分子生物学实验之一，逆转录是以 RNA 为模板合成 DNA 的过程，即 RNA 指导下的 DNA 合成，逆转录实验包括3大要素，分别是引物、逆转录酶和 RNA 模板：逆转录过程1. 引物：逆转录引物主要有3种，包括 Oligo（dT）、Random Primers 和基因特异性引物（GSP）。其中 Oligo（dT）具有12-20个 T 碱基，并且与真核生物 mRNA 的 3’Poly A 尾配对，可合成全长的 cDNA，但仅扩增有 polyA 尾的 mRNA ，对模板质量要求高，较适合克隆实验。而 Random Primers 具有6-9个碱基，可随机识别模板并结合，适合复杂结构和微量模板，但特异性低，小片段多，适合后续 qPCR 实验。基因特异性引物可以识别特定模板序列，具有特异性强，灵敏度高的特点，但需合成特定的序列。所以根据不同实验需求可进行相应引物的选择。2. ………………………………