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做个qPCR还什么熔解不熔解的……

实验万事屋  · 公众号  · 科研  · 2018-07-16 08:15
我叫骨头,长得很黑不是我的错,我是新来的NPC,qPCR这种东西吧,我确实还是不熟悉。上次给林师兄跑了一个qPCR,他嫌我用错了程序,什么Taqman不能什么什么熔解。杀姐姐:小林子说的是所谓的熔解曲线,熔解曲线是SYBR Green法的qPCR过程中较为常见的一种方法。首先我们来看看什么是SYBR Green法的qPCR,SYBR Green其实和EB差不多,都是结合到双链DNA的小沟中才能发出荧光。就像是这样:PCR的产物都是双链,那在PCR跑完之后,在有SYBR Green的情况下,就会有大量的荧光。但DNA有一个特性,就是在提高温度的时候,会由双链,解链成为单链。这就是说明,DNA在加温变成单链的时候,结合在小沟里的SYBR Green就因为没有地方可以结合,逐渐变少了,于是荧光就下降了。DNA还有一个特 ………………………………

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