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Western Blot最全攻略:从protocol到问题解决

小张聊科研  · 公众号  · 科研  · 2018-12-10 11:26
蛋白免疫印迹(western blotting)一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测3个部分组成,是根据抗原抗体特异性结合检测样本中某种蛋白的方法,与ELISA不同的地方在于WB是一种半定量的检测方法。操作流程如下:                       下面详细介绍一下每个操作步骤:一、样本的制备(1)样本一般是组织和细胞,根据样本类型的不同,选择合适的裂解液:样本类型裂解液全细胞NP-40、RIPA细胞质(可溶性)Tris-HCl细胞质(细胞骨架)Tris-Triton膜结合部分NP-40、RIPA细胞核RIPA、核裂解液线粒体RIPA(2)抑制剂,根据研究的目的蛋白进行选择,假如要检测磷酸化的蛋白含量,就要对磷酸酶进行抑制,现在很多公司都有多种抑制剂的混合物抑制剂靶点浓度抑肽酶胰蛋白酶、血 ………………………………

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