选择性疏水作用色谱法用于超螺旋DNA质粒的高纯度分离

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摘要： 高纯度的质粒DNA（pDNA），特别是超螺旋构型（SC），在多种生物制药应用中非常重要，例如作为生产基因治疗病毒载体的转染剂、pDNA疫苗，或作为线性形式的前体，用作mRNA合成的模板。在临床生产中，pDNA通常从大肠杆菌细胞中提取，使用碱性裂解后跟阴离子交换色谱或切向流过滤作为捕获步骤。这两种方法都能去除大量宿主细胞污染物，但无法普遍区分SC和开环（OC）pDNA构型以及其他DNA杂质，如基因组DNA（gDNA）。疏水作用色谱（HIC）通常用作pDNA的抛光纯化。我们开发了一种基于HIC的抛光纯化方法，对富集SC pDNA具有高度选择性。该技术通用于质粒大小，可扩展，并符合GMP标准。技术使用硫酸铵，一种kosmotropic盐，在对SC pDNA结合到丁基单体柱上具有选择性的浓度，而OC pDNA和gDNA在流通过时被去除。该方法在编码多种腺相关病毒和mRNA的质粒上 ………………………………