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Tem–PCR自2003年由韩健教授开发，经过数十年的 研究和发展，在病原微生物鉴别诊断、基因分型、耐药基因研究以及食品卫生安全等领域得到了广泛的应用。但是在国内使用的较少， 国外已研制出多种病原微生物的 Tem–PCR 检测试剂盒。 该技术的原理如下图所示，包含１对巢式特异性引物和 １对能识别标签序列的超级引物。巢式特异性引物包括外引物 Fo(Forward out)、Ro(Reverse out)和内引物 Fi(Forward in)、Ri(Reverse in)。内引物 Fi、Ri的 5′端各添加一段非同源性序列作为标签，标签序列以 10~20 bp 为宜。再设计1对能识别标签序列的超级引物 Fs(ForwardSuper Primer )和 Rs(Reverse Super Primer)，并仅在Rs 的 5′端加上荧光素标记。 Tem–PCR 反应分 3 个阶段进行： 第 1 阶段 是 巢式外引物特异性识别待检靶标序列，此阶段低浓度的巢式引物量和较少的循环次数主要用于最初靶
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