主要观点总结
本文介绍了质粒的基本概念、结构、功能以及如何使用质粒进行基因表达。文中详细阐述了质粒的复制起始位点、增强子、启动子、抗性基因等元件的作用，并介绍了如何使用酶切位点、多克隆位点以及同源重组法构建表达的基因的质粒。同时，文章还涉及了质粒的转化、鉴定、筛选以及测序验证等实验操作。
关键观点总结
关键观点1: 质粒的基本概念
质粒是一个能自我复制并表达蛋白的环状双链DNA。
关键观点2: 质粒的结构和元件
质粒由复制起始位点、增强子、启动子、抗性基因等元件组成。
关键观点3: 如何使用质粒进行基因表达
通过酶切位点去除质粒原本要表达的蛋白对应的DNA序列，再替换成想要表达的蛋白对应的DNA序列，然后将质粒转入细胞中，就能让基因/蛋白A在某细胞中过表达。
关键观点4: 质粒的构建过程
根据实验目的选择合适的质粒载体和受体细胞，使用酶切法将载体切开，然后通过PCR扩增出目的片段并回收，最后通过连接酶将载体和目的片段连接成环状质粒。
关键观点5: 质粒的转化、鉴定和筛选
将连接好的质粒转化到感受态细胞中，然后通过铺板、挑菌、菌P鉴定等步骤筛选出成功连接的质粒。最后通过Sanger测序验证质粒的碱基序列是否正确。
文章预览
质粒是什么？ 都知道细胞核中的染色体基因表达翻译蛋白质执行生命的各项活动但!人们发现在原核细胞的胞质中还存在另一个“东西”也能做这一套事情这个“东西”叫 质粒一个能自我复制并表达蛋白的环状双链DNA 先弄清一些概念 载体: 常见的包括质粒载体/噬菌体载体/病毒载体,我们接下来说的是质粒载体 质粒: 一个能自我复制并表达蛋白的环状双链DNA 质粒载体/空载体: 还没插入目的片段的环状质粒 外片/目的片段/插入片段: 待插入质粒载体的想表达的DNA片段 质粒 =载体+目的片段 质粒结构和功能？ 世上有很多种质粒,天然存在的、人为改造的……样子功能数不胜数但!好比再复杂的“人”,都由“鼻子+眼睛+嘴巴+耳朵”构成 “鼻子+眼睛+嘴巴+耳朵”就是质粒的“元件” fiori质粒复制起始位点 :和DNA复制一样,质粒能在真核or原核细胞中自我复制 enhan
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