干货：DNA甲基化测序后的后期验证方法

主要观点总结

文章介绍了DNA甲基化研究的后期验证方法，包括简单验证、全基因组甲基化干扰实验（非靶向）和靶向目标基因的甲基化/去甲基化实验验证。每种验证方法都详细阐述了具体的实验步骤和技术手段，如Target-BS、RT-qPCR、Western blot等。

关键观点总结

关键观点1: DNA甲基化研究的后期验证重要性

为了确认测序分析结果的准确性，对感兴趣的内容进行后期验证是必要的。

关键观点2: 简单验证方法

简单验证包括目标基因DNA甲基化的验证、检测目标基因的mRNA表达水平和蛋白质表达水平。使用的技术有Target-BS、RT-qPCR和Western blot。

关键观点3: 全基因组甲基化干扰实验（非靶向）

非靶向实验包括DNA甲基化干扰和检测整体DNA甲基化变化。其中DNA甲基化抑制剂阿扎胞苷能够降低细胞的DNA甲基化水平。检测手段包括5mC甲基化免疫荧光染色、DNA斑点杂交、比色法和质谱法等。

关键观点4: 靶向目标基因的甲基化/去甲基化实验验证

该验证方法包括目的基因DNA甲基化的干扰、检测目标基因的DNA甲基化变化、mRNA表达水平、蛋白质表达水平和细胞功能受到的影响等。其中CRISPR-Cas9靶向编辑DNA甲基化技术和Target-BS是重要手段。

关键观点5: Target-BS技术介绍及优势

Target-BS是一种针对靶基因DNA甲基化的高通量测序技术，具有多基因多重扩增、超高深度甲基化测序、检测灵敏度和准确性高等优势。其应用方向包括已知位点的甲基化Biomarker筛选、验证及临床转化应用。